MRD简介
白血病初发时,病人体内的白血病细胞数量为1012~1013;诱导治疗缓解后,虽然显微镜下骨髓形态正常,但患者体内的白血病细胞仍然有108~109,这就是微小残留白血病(minimal residual disease, MRD)。因此白血病人需要多次巩固和强化治疗以进一步减少体内白血病细胞数,使MRD降到10-4以下,减少疾病复发的可能性。
MRD检测的意义
技术优势
一站式服务:提供从PBMC分离,DNA提取,CDR3扩增、建库、测序、后续信息分析一系列全方位的服务;
准确度高:本公司是基于HTS(高通量测序技术),灵敏度可达到10-5数量级以上,远低于白血病完全缓解10-4需求;
重复性强:同一样本重复检测克隆情况一致性高;
扩增偏好性低:采用两步PCR法建库,降低扩增偏好性;
专业性强:具有完善的CDR3扩增体系,能高质量的扩增出患者CDR3序列,不漏检、无假阳性。
技术流程
技术参数
一、样本要求
样品类型 | 最低送样量 | 建议送样量 |
外周血 | 5ml | 10ml |
骨髓抽提液 | 2ml | 5ml |
PBMC | 500ng | 1ug |
gDNA | 1ug | 2ug |
二、项目执行周期
按标准流程,运转周期约为40个工作日。
三、服务对象
急性/慢性淋巴细胞白血病。
案例分析
HTS用于CLL MRD监测及异基因造血细胞移植(allo-HCT)后免疫重构评估
研究发现,通过HTS技术对患者外周血IGH序列检测,可以直观的观察到在诊断初期,患者IGH谱系主要以CLL克隆为主,allo-HCT后,随着时间推移,患者V-J重排逐渐出现多样性。
IGH-HTS揭示CLL患者在allo-HCT治疗后IGH谱系重组的动力学。 检测了患者在诊断时以及allo-HCT治疗后第+56,+ 180,+ 365和+550天外周血中所有V-J重组。 每部分底部的x轴表示IGH 1-49 V片段,其与每部分顶部的x轴定义的IGH 1-6 J片段组合。 y轴表示重组的总读数;CLL克隆型用星号表示; 该患者供体的谱系也列出用与比对。
参考文献:Logan A C, Gao H, Wang C, et al. High-throughput VDJ sequencing for quantification of minimal residual disease in chronic lymphocytic leukemia and immune reconstitution assessment[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2011, 108(52):21194.